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新聞資訊
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長期在-20℃凍存的細(xì)胞會怎么樣呢？
在細(xì)胞生物學(xué)研究中，為了更好而長期地研究細(xì)胞生物學(xué)功能，需要將良好狀態(tài)的細(xì)胞保存起來，以備將來使用！
我們實(shí)驗(yàn)室也不例外，春節(jié)前將轉(zhuǎn)染慢病毒的293T細(xì)胞凍存后放入-20℃冰箱程序降溫，回家歸心似箭忘記轉(zhuǎn)入液氮中，節(jié)后實(shí)驗(yàn)小姐姐抱著好奇心想看看細(xì)胞凍存后在-20℃放置十天會咋樣,對凍存的細(xì)胞按照標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行了細(xì)胞復(fù)蘇。
將復(fù)蘇后的細(xì)胞放置于CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀10X鏡頭上，進(jìn)行觀察拍照，圖像如下：
293T-GFP復(fù)蘇0h：
293T-GFP復(fù)蘇6h：
293T-GFP復(fù)蘇12h：
293T-GFP復(fù)蘇18h：
通過小編用CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀在培養(yǎng)箱內(nèi)拍攝的293T-GFP細(xì)胞復(fù)蘇后不同時(shí)段圖像，大家可以看到細(xì)胞基本上完全趨于死亡，說明細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。
凍存細(xì)胞正確的程序性降溫環(huán)節(jié)供大家參考：首先 ﹣4 ℃ 30 分鐘，20 ℃ 30 分鐘，﹣80 ℃過夜，最后進(jìn)行液氮保存。
另有一種比較實(shí)用的降溫方法：用最少兩厘米厚的醫(yī)用棉紗將凍存管緊緊包裹，扎緊，直接放入-70 ℃冰箱，隔夜取出凍存管直接放液氮凍存。或直接采用程序性降溫盒更為方便。
細(xì)胞凍存的原理則是隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)的酶活性會逐漸降低，當(dāng)溫度到-70℃左右，酶活性幾乎為0，代謝活動停止；到-130℃左右，細(xì)胞能達(dá)到最佳活率；在液氮中-196℃左右可以實(shí)現(xiàn)長期保存。然而，隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)外的水分也會“結(jié)冰”并形成冰晶，冰晶能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。因此常加入冷凍保護(hù)劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。
言歸正傳，通過CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀觀察-20℃凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后的狀態(tài)，不僅讓大家實(shí)時(shí)觀察到錯誤凍存細(xì)胞后細(xì)胞的狀態(tài)，也讓大家認(rèn)識到不規(guī)范操作對細(xì)胞的損傷是不可逆的，CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀為您的生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航，值得各位細(xì)胞生物研究工作者擁有！
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