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新聞資訊
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活細胞成像在細胞AMPI雙染實驗中的應(yīng)用
實驗時間：
2025年03月05日14：50-15：50
實驗設(shè)備及廠家：
CELLImage Mini全自動活細胞成像儀（聯(lián)慶瑞奇）、離心機（國產(chǎn)）
實驗耗材及廠家：
24孔板（國產(chǎn)）、離心管（國產(chǎn)）、載玻片及蓋玻片等
實驗試劑：
Calcein-AM/PI雙染試劑盒（國產(chǎn)）、去離子水、胰蛋白酶（逸漠生物）、PBS緩沖液（逸漠生物）等
細胞類型：
HELA細胞為例
貼壁細胞原位AMPI染色實驗方法步驟：（直接在24孔細胞培養(yǎng)板中進行）
1.染色前處理：
1.1從低溫冰箱內(nèi)取出10xAssay Buffer，根據(jù)單次用量無菌條件取出適量，用去離子水10倍稀釋以得到1xAssay Buffer。
1.2將Calcein-AM用1xAssay Buffer按1:500倍稀釋；將PI用1xAssay Buffer按1:200倍稀釋。
2.細胞處理：
貼壁細胞吸干孔中的培養(yǎng)基，用PBS浸洗2min，重復(fù)兩次，加入胰蛋白酶消化后，收集細胞，用1xAssay Buffer洗滌細胞，450g離心5min，重復(fù)2次，去除殘留的胰酶和酯酶。
3.染色步驟：
3.1離心得到細胞沉淀用1xAssay Buffer重懸，細胞密度約3*10^5個/ml。
3.2加入200ul工作濃度的Calcein-AM溶液，染色15-25min；
3.3隨后加入200ul工作濃度的PI溶液，染色5min左右。
3.4孵育熒光后的細胞，450g離心5min，去除染色液。
3.5用1X的PBS清洗細胞450g離心5min后，用PBS重懸細胞，取3-5ul滴在潔凈的載玻片上，蓋上干凈的蓋玻片。
4.圖像采集：
用CELLImage Mini全自動活細胞成像儀觀察并進行圖像采集。
融合圖層效果
5.實驗總結(jié)：
CELLImage Mini全自動活細胞成像儀不僅能夠動態(tài)監(jiān)測細胞實驗全程的生長變化信息，揭示細胞殺傷、分裂、遷移等生命活動的細微變化過程，記錄實驗過程中關(guān)鍵信息，實現(xiàn)動態(tài)研究調(diào)控物質(zhì)對細胞的影響；而且支持紅綠藍三通道熒光拍攝，對于一些穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建、監(jiān)測細胞熒光表達、凋亡監(jiān)測、熒光染料染色實驗幫助極大?；罴毎麆討B(tài)監(jiān)測技術(shù)實驗全程不耗費人力，所有細胞圖像的拍攝記錄都可以由設(shè)備獨立完成，實現(xiàn)全自動，高通量，長期穩(wěn)定性和低干擾的結(jié)合。
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