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新聞資訊

活細(xì)胞成像用于感染增強(qiáng)劑對細(xì)胞狀態(tài)影響的監(jiān)測

2024-06-25

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是外源基因進(jìn)入真核細(xì)胞的一種重要方法。部分外源DNA或RNA通過轉(zhuǎn)染試劑的包裝輔助才能順利進(jìn)入細(xì)胞,發(fā)揮相應(yīng)的作用,進(jìn)而研究其細(xì)胞功能及相應(yīng)的影響。

通常情況下,助轉(zhuǎn)劑分子內(nèi)含有許多氨基,在生理PH下會發(fā)生質(zhì)子化,這些質(zhì)子化的氨基可以中和DNA質(zhì)粒表面的負(fù)電荷,使DNA分子由伸展結(jié)構(gòu)壓縮為體積相對較小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。轉(zhuǎn)染復(fù)合物主要是通過細(xì)胞內(nèi)吞作用將DNA轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞,形成內(nèi)含體(endosome),DNA從內(nèi)含體釋放,進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中,再進(jìn)一步進(jìn)入核內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達(dá)。通過納米技術(shù)生產(chǎn)出的轉(zhuǎn)染試劑在納米尺度表現(xiàn)出結(jié)合保護(hù)DNA能力強(qiáng)、毒性低的獨(dú)特性能,使其常用于提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的相關(guān)實(shí)驗。

那么病毒感染增強(qiáng)劑對細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率提高的同時,對細(xì)胞的培養(yǎng)有副作用嗎?為了一探究竟,設(shè)計了一個簡單的實(shí)驗來驗證一下。

實(shí) 驗 一

分別監(jiān)測兩種細(xì)胞在助轉(zhuǎn)劑下的圖像變化

病毒感染增強(qiáng)劑的推薦使用濃度,分別培養(yǎng)B16細(xì)胞和HBE細(xì)胞,用CELLImage全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)監(jiān)測兩種條件下兩種細(xì)胞0~72h的變化差異。

實(shí)驗一結(jié)論

通過CELLImage全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)監(jiān)測兩種細(xì)胞加入病毒感染增強(qiáng)劑72H后的變化可以發(fā)現(xiàn),加入病毒感染增強(qiáng)劑后,細(xì)胞狀態(tài)會明顯變差,由此可見病毒感染增強(qiáng)劑對細(xì)胞本身存在較強(qiáng)的毒性。

實(shí) 驗 二

監(jiān)測病毒感染增強(qiáng)劑病毒轉(zhuǎn)染熒光圖像

用GFP慢病毒10MOI感染B16細(xì)胞,用CELLImage全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)監(jiān)測細(xì)胞感染病毒72h后熒光表達(dá)情況。

實(shí)驗二結(jié)論

通過CELLImage全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)監(jiān)測加入病毒感染增強(qiáng)劑和不加入病毒感染增強(qiáng)劑進(jìn)行病毒感染72H后的熒光的變化可以發(fā)現(xiàn),加入病毒感染增強(qiáng)劑進(jìn)行細(xì)胞感染效率會得到明顯提升,相比于對照組有明顯的熒光表達(dá)。

實(shí)時成像對于監(jiān)測各種細(xì)胞運(yùn)動和對諸如病毒感染增強(qiáng)劑及其他藥物的反應(yīng)至關(guān)重要。特別是,當(dāng)對細(xì)胞處理不同濃度的試劑藥物時,由于濃度不同,細(xì)胞的反應(yīng)可能不同,而大量獲得每種濃度的圖像是費(fèi)時費(fèi)力的。CELLImage全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)的多定位功能、用戶友好型的配套軟件的可選性,為高質(zhì)量實(shí)驗數(shù)據(jù)的捕獲提供了一種新型的成像方法。