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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實(shí)驗(yàn)室最方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高。脂質(zhì)體作為一種工具，目的是體內(nèi)或體外輸送載體，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)； 陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞 。

    實(shí) 驗(yàn) 準(zhǔn) 備    

一般細(xì)胞轉(zhuǎn)染需要24h-72h，所以要充分了解細(xì)胞生長(zhǎng)速度，計(jì)算所需脂質(zhì)體和DNA的儲(chǔ)備量，并確認(rèn)有足夠的下列材料：Opti-MEM無血清培養(yǎng)基或者高糖無血清DMEM，Lipofectamine轉(zhuǎn)染試劑，DNA，離心機(jī)，培養(yǎng)板，微量移液器，離心管等。

    實(shí) 驗(yàn) 過 程    

鋪板：在轉(zhuǎn)染前一天（18-24h）將293T細(xì)胞傳代至24孔板中，使細(xì)胞第二天融合度達(dá)到70%-80%。

換液：次日在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前，用含血清不含抗生素的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。（抗生素的存在對(duì)于有些細(xì)胞容易導(dǎo)致轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)一定細(xì)胞毒性）

混合質(zhì)粒：參考使用說明，進(jìn)行質(zhì)粒和試劑配制混合。本次實(shí)驗(yàn)組數(shù)如下：

 

監(jiān)測(cè)成像：實(shí)驗(yàn)全程用CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀在培養(yǎng)箱內(nèi)自動(dòng)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間、無干擾的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

    實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果    

在陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀可以對(duì)推薦用量DNA、推薦用量減半DNA轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞很好的進(jìn)行熒光成像。

 

 

 

    總    結(jié)    

CELLImage Mini全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀，可用于各種基于細(xì)胞的研究。該系統(tǒng)基于先進(jìn)的熒光(綠/紅)和光學(xué)顯微鏡技術(shù)，優(yōu)化了熒光濾光片和光路，于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率或監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效果可獲得清晰的細(xì)胞圖像。此外，成像儀內(nèi)部裝載有一個(gè)隱藏式的高精度載物臺(tái)，讓您可以在更穩(wěn)定的條件下觀察活細(xì)胞的生長(zhǎng)變化，觀察不同孔位的細(xì)胞無需移動(dòng)孔板樣本，減少對(duì)細(xì)胞震蕩和應(yīng)激，實(shí)現(xiàn)無干擾的對(duì)多點(diǎn)位細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，給您帶來可信度極高的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果。