.jpg)
新聞資訊
新聞資訊
將活細(xì)胞成像用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子（如DNA，RNA等）導(dǎo)入（ 真 核 ） 細(xì) 胞 的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一 ， 將目的基因/RNAi基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞、動(dòng)物組織，并且保持長(zhǎng)期穩(wěn)定的表達(dá)，構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染可用于研究細(xì)胞過(guò)程和疾病分子機(jī)制，并且可以作為基因治療中治療遺傳性遺傳疾病的策略，隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。
.jpg)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,通常只持續(xù)幾天，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)分析結(jié)果，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染指外緣DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記來(lái)篩選以得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。
根據(jù)轉(zhuǎn)染方法可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)
.jpg)
目前實(shí)驗(yàn)室最常用的轉(zhuǎn)染方法為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。細(xì)胞轉(zhuǎn)染常規(guī)易操作，但是轉(zhuǎn)染效率卻并不一定能符合期望，這是因?yàn)榧?xì)胞轉(zhuǎn)染受到影響的因素多樣，如細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與密度、培養(yǎng)基、載體大小、轉(zhuǎn)染試劑、抗生素、血清以及氮磷比等。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的步驟如下圖所示：
.jpg)
為了能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)與密度，確定最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間以及用于后續(xù)轉(zhuǎn)染效率，CELLImage全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀可以很好地應(yīng)用于確定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率或監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染的效果。CELLImage全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀優(yōu)化了熒光濾光片和光路，可以以最小的光強(qiáng)實(shí)時(shí)獲得清晰的活細(xì)胞明場(chǎng)圖像和熒光圖像，極大程度地降低細(xì)胞光毒性。
慢病毒轉(zhuǎn)染hela細(xì)胞應(yīng)用實(shí)例：
通過(guò)CELLImage Nano全自動(dòng)活細(xì)胞成像儀在4x物鏡綠色熒光通道下，每隔6小時(shí)觀察轉(zhuǎn)染GFP慢病毒的HeLa 細(xì)胞中綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)情況，共計(jì)觀察時(shí)間約72小時(shí)。
結(jié)果表明綠色熒光蛋白從轉(zhuǎn)染24小時(shí)后可見(jiàn)明顯熒光表達(dá)，72小時(shí)后更加明顯。
.jpg)
.png)
