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將活細(xì)胞成像用于穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選
什么是穩(wěn)定細(xì)胞株?
說到穩(wěn)定細(xì)胞株，相信生物行業(yè)的用戶都有一定的了解，它是蛋白抗體大規(guī)模生產(chǎn)的一個重要手段，能夠大批量提供高純度蛋白。但是對于大部分的人來說，穩(wěn)定細(xì)胞株也不過是個名詞而已，也僅僅只是知道它是一個抗體制備的手段而已。今天就和大家具體聊聊穩(wěn)定細(xì)胞株，并和大家具體分享一下，構(gòu)建這么一個系統(tǒng)的意義所在。
穩(wěn)定細(xì)胞株可以從字面來進(jìn)行理解，就是能夠穩(wěn)定表達(dá)蛋白抗體的細(xì)胞株。通過以某細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)性過表達(dá)或通過干擾某固定基因從而構(gòu)建成的細(xì)胞體系。
為什么要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株呢?
通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株能夠有效地降低因為頻繁轉(zhuǎn)染所產(chǎn)生的成本，而且能夠在目的基因中更好地進(jìn)行相關(guān)研究；
和瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞株不僅能夠干擾表達(dá)，而且能夠更好地去除已表達(dá)的目的蛋白；
穩(wěn)定細(xì)胞株可以更好地進(jìn)行蛋白篩選，同時可以復(fù)制適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的科學(xué)研究；
如何構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株呢？
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染監(jiān)測
通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染即慢病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞后用CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀觀察熒光的表達(dá)情況，綠色熒光蛋白從轉(zhuǎn)染24小時后可見明顯熒光表達(dá)，72小時后更加明顯。
嘌呤霉素篩選監(jiān)測
將含適宜濃度嘌呤霉素的培養(yǎng)基加入表達(dá)GFP綠色 熒 光 蛋 白 的 細(xì) 胞 孔 中 ， 持 續(xù) 培 養(yǎng) 24H 。 用CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀對嘌呤霉素篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株過程進(jìn)行監(jiān)測，培養(yǎng)0~24H能準(zhǔn)確知道篩選過程同一視野從開始到結(jié)束的細(xì)胞連續(xù)變化，對細(xì)胞變化進(jìn)行非侵入性的、固定視野的連續(xù)記錄分析監(jiān)測。
嘌呤霉素篩選明場及熒光成像變化
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CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀監(jiān)測圖像可以看出，在含有適宜濃度嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24H左右不表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞在嘌呤霉素作用下發(fā)生調(diào)亡，表達(dá)綠色熒光蛋白的細(xì)胞能在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中正常增殖存活。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的培養(yǎng)
用CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀對穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株培養(yǎng)過程進(jìn)行監(jiān)測。通過比較同一視野明場及熒光圖像，可以判定本次穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選成功。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株培養(yǎng)48H左右的熒光、明場及熒光明場疊加圖層成像
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CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀監(jiān)測圖像可以看出，經(jīng)過嘌呤霉素篩選后的細(xì)胞，能持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白。
結(jié) 論
構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，運用CELLImage全自動活細(xì)胞成像儀進(jìn)行抗生素篩選實驗實時連續(xù)監(jiān)測，可以非常直觀的看到篩選的動態(tài)過程，有效的篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。該方法相比于傳統(tǒng)的細(xì)胞株構(gòu)建方法，既簡便又直觀，是細(xì)胞實驗室的不二選擇，大家值得擁有！
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